与ATP6相互作用的蛋白质的筛选及基因的cDNA克隆.pdf

『大学硕士学位论文趔墨!!!!担至监旦煎量鱼厦盟篮连垦垂垦盟!!!!盘堕作者主塑塑完成生旦!目婿养一社位生全盟生生睦指甘老师主堑生塾蕉弓业垂堡茔研究方向蕉盐逮鲎攫于学位引生旦目朋川人学顾：学位论文与相互作用的蛋白质的筛选及基因的克隆遗传学专业研究生：李娜娜指导教师：李旭锋摘要植物细胞质雄性不育是一种不能产生有活力花粉的遗传性状，在高等植物中，是一种常见的生物学特征。甘蓝型油菜，是世界上广泛种植的一种油料作物，其杂交种能比亲本最高增产％，因此把雄性不育应用于杂交种的生产具有重大的意义。目前，人们对于甘蓝型油菜雄性不育的研究主要集中于萝胞质不育，波里马胞质不育和胞质不育。波里马细胞质雄性不育因其不育性稳定，容易找到恢复基因，此不育系被认为在杂交中的生产中是最有优势的。研究表明，由于线粒体的重排，在编码—钔合成酶第六亚基的基因(口垆)的上游产生一个嵌合的具有个密码子的开放阅读框(矿)，它与基因共转录，而这个基因区域是与甘蓝型油菜性状是相关的。酵母双杂交系统是近年来发展起来的一种有效的体内研究蛋白质之相互作用以及筛选文库的技术手段。为了深入研究与发生相互作用的，可能与油菜雄性不育有关的基因，我们采用了酵母双杂交系统进行蛋白质的筛选。将叻，基因和载体∞连接构建重组诱饵质粒／。将双链和质粒一按照顺序转化的方法转化含有诱饵质粒／的酵母，通过营养缺陷型的选择和半乳糖苷酶()活性检测进行筛选，初步获得酵母阳性克隆。提取阳性酵母的总，进行检测，并用限制性内切酶进行酶切，根据结果和酶切结果，剔除相同的片段，选